Tailoring the evolution of BL21(DE3) uncovers a key role for RNA stability in gene expression toxicity | Communications BiologyGene expression toxicity is an important biological phenomenon and a major bottleneck in biotechnology.Escherichia coliBL21(DE3) is the most popular choice for r...

使用时pEGFP/puro与pCas9/gRNA1载体或者pCas9/gRNA3载体共转染，用荧光标签或者嘌呤霉素对转染后的细胞进行初步筛选，可以显著提高基因敲除成功细胞的阳性率，减少后续细胞克隆检测数量。这个步骤对于转染效率较低的细胞尤其有效。...

载体特性 类型：慢病毒基因过表达载体 荧光标签：EGFP 真核细胞筛选抗性：Puromycin 原核抗性：Ampicillin pLV-Pro-Luci载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体，主要用于启动子活性检测。载体中luciferase基因上游有多克隆位点，可以克隆进感兴趣的启动子序...

Quantification of long non-coding RNAs using qRT-PCR: comparison of different cDNA synthesis methods and RNA stability - PMC长非编码RNA(lncRNA)是一类调控RNA分子，长度超过200个核苷酸，可用作新的潜在生物标志物，但其检测方法如qRT-PCR仍未得到验证，RNA降解对lnc RNA定量的影响尚不清楚。在这项研究中，测试了...

RNA干扰(RNAi)是治疗和研究应用中序列特异性基因敲除的有力工具。然而，需要对RNAi进行时空控制，以减少非特异性靶向、潜在毒性，并允许靶向必需基因。在本文中，我们描述了一类从头设计的RNA开关，其能够在哺乳动物细胞中对RNAi进行序列特异性调节。使用顺式抑制RNA元件，我们设计了RNA装置，该装置仅在与同源触发RNA结合时...

美国麻省理工学院布罗德研究所和哈佛大学科学家借助人工智能（AI）的力量，通过筛选数百万种化合物，发现了一类全新的抗生素。这类抗生素能杀死两种不同类型的耐药细菌，为应对全球性的抗生素耐药性挑战带来了新希望。相关论文发表在新一期《自然》杂志上。科学家测试了39000多种化合物对金黄色葡萄球菌和来自肝脏、骨骼肌和...

虽然RNA和蛋白质的亚细胞动力学是细胞稳态的关键决定因素，但它们的表征仍然具有挑战性。在这里，我们提出了一个整合的框架，通过结合两种方法在亚细胞分辨率下同时询问转录组和蛋白质组的动力学:RNA的定位(LoRNA)和基于密度的同位素标记定位(dLOPIT ),以将RNA和蛋白质映射到细胞器(细胞核、内质网和线粒体)和无膜区室(胞质...

分离自萤火虫萤火虫(Ppy)的荧光素酶催化两步反应，导致d-荧光素的氧化，伴随着峰值在560 nm的黄色-绿色光的发射。在许多应用中，Ppy荧光素酶已被广泛用作活细胞和生物体中的报告基因。然而，荧光素酶的低稳定性和有限的细胞内荧光素浓度限制了一些生物应用。为了应对这些挑战，对Ppy荧光素酶进行蛋白质工程改造的努力已经产...

2019年2月12日讯/生物谷BIOON/---癌症科学家Tak Mak博士以克隆人T细胞受体（TCR）而闻名。在一项新的研究中，Mak博士及其团队证实免疫细胞能够产生对抗感染的大脑化学物。这首个功能验证的发现解决了一个多世纪以来科学家们一直在思考的一个难题。相关研究结果发表在2019年2月8日的Science期刊上，论文标题为“Choline acet...

工程细胞因子产品代表了一类不断增长的治疗性蛋白质，需要在药物开发的不同阶段测试其生物活性。在大多数情况下，为不同的产品建立专门的生物检测，这一过程可能既费时又麻烦。在这里，我们描述了各种免疫调节蛋白的通用细胞报告系统的开发和实施。该新系统利用了以下事实:各种类型的促炎剂(例如，细胞因子、趋化因子、Toll...

包涵体来源的蛋白质的重折叠是非常有前途的，因为它可以提供高纯度目标蛋白质的可靠来源。然而，基于包涵体的蛋白质生产经常受到缺乏检测正确重折叠蛋白质的技术的限制。因此，重折叠条件的选择大部分是使用试错法实现的，因此是一个耗时的过程。在这项研究中，我们使用了差示扫描荧光导向重折叠方法的最新进展作为分析方法...

在细菌宿主中包涵体的形成对生物活性蛋白质的大规模回收提出了重大挑战。从包涵体中获得生物活性蛋白的过程是劳动密集型的，并且重组蛋白的产量通常很低。在这里，我们回顾了该领域的发展，旨在通过优化过程的各个步骤，特别是包涵体的溶解和溶解蛋白的重折叠，提高重组蛋白的产量和质量。已经讨论了温和的溶解方法，其基于...

来源：北大 2023-08-28 14:43 哺乳动物细胞核中的基因转录过程由三种RNA聚合酶复合物（Pol I、II、III）相互协同完成。其中，RNA聚合酶III（Pol III）不仅是细胞核内转录tRNA、5S rRNA、SINEs等短基因 哺乳动物细胞核中的基因转录过程由三种RNA聚合酶复合物...

原核表达系统具有成本低，产量高，工艺简单等优点。但由于原核表达的蛋白量大，大肠杆菌缺乏折叠辅助蛋白等多种因素，许多原核表达的蛋白不能正确折叠，形成包涵体。我们可以分析目标蛋白的性质特点，采用添加分子伴侣、氧化还原、柱上复性等多种复性方法，...

在CRISPR成为基因组编辑的超级巨星之前，它还有一个基本功能，那就是保护细菌免受噬菌体的入侵。如今，研究人员决定以其人之道还治其人之身，希望用CRISPR来解决日益突出的抗生素耐药性问题，并试图改造人类的微生物组。 回归天然 Rodolphe Barrangou是北卡...