lncRNA表达稳定细胞株构建服务

筛选稳转细胞株最常用的方法是通过慢病毒系统将目的基因转导进入细胞。但是因为表达lnc RNA的特殊要求，慢病毒系统确不适合用于lnc RNA的过表达细胞株构建。

慢病毒属于逆转录病毒系统，需要将包括表达框转录为完整的RNA，装入病毒颗粒，进入细胞后再逆转录为DNA，插入细胞的基因组中。因此整个病毒的表达框中不能添加RNA转录终止信号。这一特点在使用病毒表达蛋白时并没有不利影响。因为蛋白有翻译终止位点，多余的RNA并不能导致蛋白产物的序列错误。但是在慢病毒系统生成的lnc RNA产物不能正常终止转录，得到的lnc RNA产物比内源lnc RNA长2kb以上，不正常的lnc RNA结构影响RNA二级结构，并最终影响lnc RNA的功能（. J Nanobiotechnol 19, 303 (2021). https://doi.org/10.1186/s12951-021-01044-7）。

我公司采用SB转座子系统构建lnc RNA过表达稳定细胞株，与慢病毒系统相比，SB转座子系统可以更好的模拟内源lnc RNA表达结构，正常添加RNA转录终止信号，从而生成与内源长度和序列一致的lnc RNA，实现lnc RNA的正常功能。

多种转座子lncRNA表达载体可供选择

我们的转座子lncRNA表达稳转株构建服务提供了多种表达载体。包括常见的CMV启动子、EF1a启动子、TET可诱导启动子，以及多种筛选标签。您也可以自行设计构建特殊的启动子或者标签，我们可以为您提供辅助的设计方案。

工作流程

一   与客户沟通确定方案

我们有成熟lncRNA表达技术和经过实验验证功能的专门lnc RNA表达载体。您可以从中挑选符合您实验需要的载体，也可以与我们沟通您的特殊实验方案。只需要您提出要求，我们可以协助您设计表达方案。

二   合成lncRNA表达载体

在表达方案设计完成后，我们将合成lncRNA的序列，并构建到转座子载体上。如果有特殊的要求，需要构建新的转座子载体，也将在这一步完成。我们将以最优惠的费用为您完成基因合成（见基因合成服务）。

三  转染细胞

与慢病毒系统不同，转座子只需要直接质粒转染进入细胞后就可以整合到细胞基因组DNA。我们将根据细胞的特性，选择脂质体、阳离子转染试剂或者电转化的方法，将构建好的转座子载体转入细胞。

四  筛选稳定细胞株

转染完成后，我们将根据质粒携带的筛选标签，筛选稳定细胞株。通常筛选10天左右，就可以得到稳定多克隆株。我们也提供单克隆株筛选服务，您可以根据需要选择（详见细胞单克隆服务）。

五  功能检测

我们提供基础的qPCR检测lncRNA是否表达成功。同时，我们也提供部分简单的功能检测实验。由于lncRNA的功能多种多样，许多还在探索中，具体需要做哪些功能实验以及我们能否有能力检测，请具体沟通。