Quantification of long non-coding RNAs using qRT-PCR: comparison of different cDNA synthesis methods and RNA stability - PMC长非编码RNA(lncRNA)是一类调控RNA分子，长度超过200个核苷酸，可用作新的潜在生物标志物，但其检测方法如qRT-PCR仍未得到验证，RNA降解对lnc RNA定量的影响尚不清楚。在这项研究中，测试了...

摘要：背景：慢病毒载体能在分裂和非分裂细胞中实现稳定基因转移的有效载体。为提高生物安全性和转基因表达，现已对载体设计进行了多项改进，使这些载体被批准用于临床研究。因此，研究分析慢病毒载体生产质量、基因转移效率和治疗性基因表达程度的方法十分必要。结果：我们比较了测量pg p24/ml、RNA含量/ml、转导单位（TU/...

摘要优化重组蛋白的生产是一个重要的工业和制药问题。宿主细胞对蛋白质的分泌大大简化了下游的纯化过程。然而，对于许多蛋白质来说，这也是限制生产的步骤。目前的解决方案包括对底盘细胞进行广泛的工程改造，以促进蛋白质运输，并限制由过度分泌相关压力引发的蛋白质降解。在这里，我们提出了一个基于调节的策略，在这个策...

作者开发了一种新的、简单的、高通量的方法来分离大肠杆菌K-12的全基因组转座子插入突变体。该方法的基本思想是通过首先插入一个小型转座子，随机破坏在Kohara文库上克隆的DNA片段上的基因，然后通过同源重组将破坏的基因从载体转移到大肠杆菌染色体上。利用这种方法，我们构建了一组8402 Kmr顺式二倍体突变体，染色体上带有...

在代谢工程领域，以高通量和可扩展的方式解析基因型和表型的关系仍然不成熟。虽然RNA指导的核酸酶Cas9已被赋予新的用途，用于可编辑的转录调控，但是它的应用被局限于双重调控开关，因此错过了潜在的最佳中间水平的基因表达。此项研究建立了一个快速的方法用...

siRNA合成的方法主要包括： 1、化学合成 2、体外转录 3、长片断dsRNA经RNaseIII类降解（如Dicer、E.coli、RNaseIII） 4、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs 5、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 前三种方法主要都是体外制备siRNAs，并且需要专门...

英茂盛业慢病毒RNA干扰载体构建方法.可以构建我公司慢病毒RNA干扰载体pLVshRNA-EGFP、pLVshRNA-Puro和双标RNA干扰载体pLVshRNA-EGFP（2A）Puro。...

在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。例如Hela细胞用400 g/ml的G41或1 g/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛...