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我们根据pTYNE载体的序列设计了pCas9/gRNA1对照阳性质粒pCas9-P，该质粒上的gRNA与pTYNE上EGFP编码区上游结合。pCas9-P表达的Cas9蛋白和gRNA组合现对pTYNE载体切割，经细胞修复后，突变的pTYNE将表达出读码框正确的EGFP蛋白，发出明亮的绿色荧光。...

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通过采用Cas9 D10A突变蛋白，对DNA进行单链而不是双链切割，解决CRISPR/gRNA系统中的脱靶问题。...

1、反应后无扩增曲线出现 确认程序中是否设置了信号采集步骤：两部法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。 扩增效率问题：电泳检测realtimePCR反应产物，观察是否有正确大小的目的条带出现。如果没...

实时荧光定量PCR（RealtimePCR，QPCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程， 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到 定量的飞跃，它以...

pLV-Dual载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体，可以用于慢病毒表达基因或直接转染细胞表达基因。载体中含有CMV启动子和SV40启动子，可以实现在同一个载体中表达2个基因。PGK启动子启动Puromycin抗性基因表达。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基...

TALEN 敲除小鼠 P53 基因及 talen 质粒活性验证 验证原理： 将 talen 靶点附近序列从基因组上扩增，克隆到验证质粒中 EGFP 基因上游，与 EGFP 基因融合。 Talen 质粒对与验证质粒共转染 293V 细胞，表达的 talen 蛋白对验证质粒上靶点序列进行切割，造成 EGF...

【据日本《产经新闻》8月2报道，日本京都大学iPS细胞研究所江藤浩之教授(干细胞生物学)带领的研究团队8月1日发表声明称，使用源于血液病患者体内的人工诱导多功能干细胞(iPS细胞)进行实验时，发现了红血球合成的部分过程。该结果刊登在了美国科学杂志《临床...

科技日报讯 （记者刘霞）据英国《每日电讯报》7月16日（北京时间）报道，美国科学家使用人体诱导多能干细胞（iPS细胞）制造出了能在实验鼠体内存活280天的 人造血管 。发表在最新一期美国《国家科学院学报》上的这项研究成果有助于开发出新的心脏病和糖尿病...

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