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pLV-TRE-Cas9-Puro可诱导慢病毒表达载体（CR3101）

货号：CR3101

载体类型：慢病毒表达载体

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin   

基因启动子：TRE promoter

过表达基因：spCas9(HF1)蛋白

使用说明：

1、该载体在TRE启动子控制下表达spCas9-HF1蛋白。spCas9-HF1蛋白为spCas9的突变体，与野生型spCas9蛋白相比，spCas9-HF1蛋白能显著减少非特异性切割。spCas9-HF1蛋白有NLS核定位信号及Flag标签。

2、稳转细胞筛选

该载体为慢病毒载体，与包装载体pH1、pH2（货号KLV3500）配合生产慢病毒，转染目的细胞。然后用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。

3、诱导表达

该载体中的目的蛋白表达依赖TetON蛋白调节。配套pLV-TetON-Neo载体可实现spCas9可诱导表达。诱导剂可选Doxycline，诱导浓度50-500ng/ml（根据细胞类型不同有较大区别）。

4、配套材料：

慢病毒包装载体：pH1、pH2（货号KLV3500）

包装细胞：HEK293V（货号C1201）

TetOn调节蛋白表达载体：pLV-TetON-Neo（货号CR3102）或pLV-TetON-Bsd（货号EL6001）

可诱导阳性对照载体：pLV-TRE-luci-puro（货号EL6002）或pLV-TRE-EGFP-puro（货号EL6003）

筛选抗生素：puromycin

原核抗生素：氨苄青霉素

诱导剂：四环素或者Doxycline