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pLV-mCherry(2A)Puro 慢病毒基因过表达载体（VL3405)

载体特性：

类型：慢病毒基因过表达载体

基因启动子：CMV IE promoter 

荧光标签：mCherry 

真核细胞筛选抗性：Puromycin 

原核抗性：Ampicillin 

pLV-mCherry(2A)Puro 载体是基于 HIV1 的慢病毒基因过表达载体，采用 CMV 启动子启动目的基因 的表达。通过将 mCherry 基因放在不同的启动子，该载体保留了 mCherry 蛋白便利性，也避免了融合 标签蛋白对目的基因功能产生影响。 PGK 启动子驱动表达 mCherry 基因和 Puromycin 抗性基因。可以使用 Puromycin 筛选出稳定过表达 目的基因的细胞。mCherry 基因有助于判断病毒包装效率以及感染效率，同时也有助于稳定细胞的筛选。 pLV-mCherry(2A)Puro 载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到 3kb，多数哺 乳动物基因都可以在 pLV-mCherry(2A)Puro 中成功表达。

用法说明 

pLV-mCherry(2A)Puro 载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin 抗性基因。pLV-mCherry(2A)Puro 载体与包装载体共转染 HEK293T 细胞后（包装体系货号 KLV3501和 KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

测序引物： 

正向引物 pEGFP-N-5’：CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG

反向引物 PGK-R：GGAGGAGTAGAAGGTGGCG

主要载体元件位置 

• 5' LTR: 1–635

• Psi (packaging signal): 685–822 

• RRE: 1303–1536 

• cPPT/CTS: 2028–2151

• CMV IE promoter: 2185–2788 

• MCS (multiple cloning site): 2816–2880 

• PGK promoter: 2882–3390

• mCherry: 3427-4125

• E2A: 4141-4209

• Puromycin (R): 4210-4809 

• WPRE: 4823-5414

• 3' LTR:5617-6253 

• pUC origin: 6723-7496 (complementary) 

• Amp (R): 7541-8537 (complementary) 

原核培养特性：

pLV-mCherry(2A)Puro 载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有 100 μg/ml 氨苄抗生素的 LB培养基中增殖。宿主菌可以采用 DH5α，JM109，TOP10 等常见大肠杆菌菌种。

使用本产品发表的文献：

R-spondin 2 promotes proliferation and migration via the Wnt/β-catenin pathway in human hepatocellular carcinoma

Elevated intracellular copper contributes a unique role to kidney fibrosis by lysyl oxidase mediated matrix crosslinking - PMC