产品资料：

品名：ERE-Luci细胞株（293）
货号：CS007
原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆）
所用载体：pLV-ERE-Luci（VL4107），pLV-ESR2-Hygro（VL4107A）
构建方法：慢病毒转染构建
抗性：puromycin hygromycin

克隆属性：多克隆细胞株

产品包装：

1 x 10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意事项：

1. 细胞收到时应该是冻存状态，并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化，请立即联系我们。

2. 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮，或者对细胞进行复苏，扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。

3. 由于运输影响，细胞复苏后1到3代可能出现形态异常，生长缓慢等情况。请传代培养2-3代，待细胞恢复正常再进行实验。

细胞形态：

细胞培养基：

DMEM （ g i b c o 货号： 12100-061）高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml
注意：采用质量可靠的血清非常重要！

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1. 准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3. 3000g    室温离心5min。

4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养基至5ml。

6. 37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。

7. 48h后根据细胞密度换液或传代。

8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5 x 10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项：生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

细胞冻存：

1. 消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为1 x 10^6 /ml左右。

2. 加入等体积的2 x 冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。

3. 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。

4. 将细胞转移到液氮罐中。

细胞功能实验：

药物染料木素（Genistein）刺激细胞，与细胞内过表达的雌激素受体结合，激活雌激素应答原件，并启动luciferase表达，通过检测luciferase活性可以灵敏地反应雌激素受体的作用效果。 

试剂：染料木素（货号：G106672，阿拉丁）；萤火虫荧光素酶检测试剂盒（货号：RC005，碧云天）

1. 实验前一天将ER, ERE基因过表达细胞株293-ER/ERE接种到24孔板；

2. 接种24h后实验组加入药物染料木素，至终浓度为1uM、10uM。每种浓度三孔重复，对照组不加药；

3. 染料木素刺激24h后按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞，并加入反应底物进行活性检测。

用化学发光成像仪检测结果见下：