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慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生RNAi干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。
慢病毒载体应用
◆将目的基因/RNAi基因转入难以转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞
◆将目的基因/RNAi基因转入动物组织,以期获得长期表达
◆构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞系,再用ex vivo的方法导入动物体内
◆基因治疗
◆转基因动物
◆基因敲除
◆药物研究:构建表达受体蛋白的细胞系,研究药物的作用
◆快速建立生产目的蛋白的细胞系,非常有前途的真核细胞表达方法
英茂盛业慢病毒载体系统
英茂盛业生产的慢病毒载体属于“第三代”4载体慢病毒体系,其基因组的3' LTR的增强子功能发生了缺失,从而形成了所谓的“自灭活”(Self-inactivation,SIN),即该病毒基因组整合到细胞基因组后,不会产生新的子代病毒,也降低了对周围基因的意外激活,因此具有较好的安全性。病毒的包膜上嵌合了来自水泡口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus)的VSV-G蛋白,使病毒能感染更多种细胞(包括分裂和非分裂细胞),且病毒更趋稳定。