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单克隆细胞系和多克隆细胞系特点及选择指南

一、单克隆细胞系和多克隆细胞系概念
多克隆细胞系是基因转染后直接用抗药筛选得到的。筛选出的细胞都表达抗性基因和目的基因。但是包含了各种不同的细胞克隆。不同克隆的目的基因整合位置和表达量均有所不同。如果转染的基因包含了荧光标签,多克隆细胞直观地表现为包含多种不同亮度的细胞集合。
单克隆细胞系是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的,由一个细胞扩增得到的细胞株。每个细胞的目的基因整合位置的表达量均高度一致。

 

二、为什么要挑选单克隆细胞
多克隆细胞系构建成功后由于不同细胞克隆生长速度不一致,目的基因表达量比较低的细胞克隆增殖速度一般更快,因此在最初的10代左右会观察到表达量逐渐下降,最后高表达量低增殖速度的细胞消失,低到中等表达量的细胞组成稳定表达克隆。
对于转染效率和表达效率低的细胞系,多克隆细胞筛选得到的细胞系中目的基因的表达量有可能不能满足实验要求。
单克隆细胞系在细胞克隆挑选后可以对目的基因表达量进行检测,挑选出高表达的细胞克隆进行培养。这一步骤在转染效率低的细胞株中尤其重要。
做细胞亚定位的稳定细胞系,存在表达量过低、荧光信号不够强,以及表达量过高、荧光蛋白聚集导致不能正确定位两种问题。单克隆细胞系挑选可以直接选出定位正确的细胞克隆。

 

三、什么时候选择单克隆细胞株
多克隆细胞株筛选比较快速,费用较低。单克隆细胞株筛选周期长,费用高。因此如果多克隆细胞株可以满足实验要求,就没有必要筛选单克隆细胞株了。
在需要构建的细胞株转染效率高,目的基因表达效率高的情况下,单克隆细胞株最后得到的表达效果和多克隆细胞株并没有显著差异。这时多克隆细胞筛选是理想的选择。反之则应选择单克隆细胞筛选。需要进行细胞亚定位实验的细胞系通常建议进行单克隆细胞筛选。
由于不同细胞系差异较大,直接判断进行哪种实验方案是很困难的。为此,我们提供免费预实验服务,对您提供的细胞进行慢病毒转染预实验,实验后提供实验方案建议及细胞系构建可行性评估。

 

单克隆细胞系和多克隆细胞系选择指南


细胞特点

推荐推荐服务类型

单克隆细胞系

多克隆细胞系

转染效率高、

 

基因过表达率高

 

细胞亚定位实验

 

RNA干扰细胞系

 

难转染的细胞

 

表达率低的基因

 


 

 

 

单克隆细胞筛选实例一 荧光蛋白表达:

A:多克隆细胞;B:单克隆1;C:细胞克隆2;D:单克隆3。
图一:目的基因克隆到慢病毒载体后与GFP蛋白融合表达。病毒感染细胞后多数细胞表达量不高,个别细胞高表达(图A)。经过单克隆细胞筛选后得到数个低表达的细胞株(以图B为例)以及两个高表达细胞株(图C和D)

 

 

单克隆细胞筛选实例二 RNA干扰细胞系:

图A是分别转染了3个靶点的RNA干扰慢病毒及NC对照慢病毒的细胞,抗药基因初步筛选后提取RNA检测目的基因干扰效率。靶点2干扰效率最高,干扰效率为70%以上。图B是靶点2转染组的细胞进行了单克隆细胞分选后对克隆细胞目的基因表达量的检测。获得了3个干扰效率在90%以上的细胞系(克隆5、6、7)。


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