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saCas9体外酶切试剂盒(PC1600)
产品简介:
本产品主要用于CRISPR/saCas9系统体外酶切实验、CRISPR靶点筛选等实验,可以在体外切割PCR产物、质粒等双链DNA。
试剂盒中提供了saCas9体外酶切所需试剂,包括saCas9蛋白,反应缓冲液,以及对照sgRNA和底物DNA。使用该试剂盒可以快速开展saCas9体外酶切实验。
产品规格:
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货号 |
PC1600-0(20次) |
PC1600-1(20次) |
PC1600-5(100次) |
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saCas9蛋白 |
100U |
100U |
500U |
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10×saCas9 Buffer |
150μl |
150 μl |
600 μl |
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阳性对照sgRNA |
- |
25 μl |
125 μl |
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阳性对照DNA |
- |
50 μl |
250 μl |
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Cleaner试剂 |
100 μl |
100 μl |
500 μl |
活性定义:37℃,30分钟切割1μg 1kB DNA双链定义为1个活性单位。
储存条件:-20℃冻存
实验步骤:
1、saCas9切割反应:
1.需准备:底物DNA,浓度大于100ng/ul;sgRNA,浓度大于200ng/ul。
!务必采用无RNA酶的耗材进行实验,注意防止RNA酶污染。
按照下表配制saCas9体外切割反应缓冲液,请按表中顺序加入:
saCas9蛋白 |
5 μl |
sgRNA |
1 μg(a μl) |
底物DNA |
1~2 μg(b μl) |
10×saCas9 Buffer |
X μl* |
*X=0.1×(5+a+b) |
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阳性对照反应:
saCas9蛋白 |
5μl |
阳性对照sgRNA |
5μl |
阳性对照DNA |
10μl |
10×saCas9 Buffer |
2 μl |
1.2吹吸混合均匀。
反应程序:
37℃ 30min
85℃ 10min
2、产物检测:
快速检测:
乙醇沉淀法检测:
本方案耗时约30min,电泳条带更清晰。
本步骤及以后的步骤不必使用无RNA酶耗材操作
2、阳性对照电泳结果:
阳性对照DNA为1000bp 双链DNA。含有单一靶点。切割产物409bp、591bp。
产品保存和使用注意事项:
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