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spCas9 SpRY突变体体外酶切试剂盒(PC1401)
产品简介:
本产品主要用于spCas9 SpRY突变体体外酶切实验和靶点筛选等实验。
SpCas9突变体SpRY识别的PAM序列为NRN(R为A/G)以及部分NYN(Y为C/T),与野生型spCas9的PAM序列NGG相比,极大的解除了PAM的限制,可供选择的靶点更多。
本试剂盒可以在体外切割PCR产物、质粒等双链DNA。试剂盒中提供了SpCas9突变体SpRY蛋白,反应缓冲液,以及对照sgRNA和底物DNA。使用该试剂盒可以快速开展体外酶切实验和筛选适合该突变体的靶点。
产品规格:
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货号 |
PC1401-S0 |
PC1401-S1 |
PC1401-0 |
PC1401-1 |
PC1401-5 |
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SpRY蛋白 |
25U |
25U |
100U |
100U |
500U |
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10×SpRY Buffer |
35μl |
35μl |
150μl |
150 μl |
600 μl |
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阳性对照sgRNA |
- |
10μl |
- |
25μl |
125μl |
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阳性对照DNA |
- |
20μl |
- |
50μl |
250μl |
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Cleaner试剂 |
25 μl |
25μl |
100μl |
100μl |
500μl |
活性定义:37℃,30分钟切割1μg 1kB DNA双链定义为1个活性单位。
储存条件:-20℃冻存
实验步骤:
1、切割反应:
1.1需准备:底物DNA,浓度大于100ng/ul;sgRNA,浓度大于200ng/ul。
!务必采用无RNA酶的耗材进行实验,注意防止RNA酶污染。
按照下表配制SpRY体外切割反应缓冲液,请按表中顺序加入:
SpRY蛋白 |
5 μl |
sgRNA |
1μg(aμl) |
底物DNA |
1~2μg(bμl) |
10×SpRY Buffer |
Xμl* |
*X=0.1×(5+a+b) |
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阳性对照反应:
SpRY蛋白 |
5μl |
阳性对照sgRNA |
5μl |
阳性对照DNA |
10μl |
10×Cas9 Buffer |
2 μl |
1.2吹吸混合均匀。
反应程序:
37℃ 30min
85℃ 10min
2、产物检测:
快速检测:
乙醇沉淀法检测:
本方案耗时约30min,电泳条带更清晰。
本步骤及以后的步骤不必使用无RNA酶耗材操作
2、阳性对照电泳结果:
阳性对照DNA为760bp 双链DNA。含有单一靶点。切割产物为两条带分别是505bp左右和255bp左右。
M:DL2000 DNA marker
1:SpRY蛋白不加gRNA切割30min
2:SpRY蛋白加gRNA1切割30min
3:SpRY蛋白加gRNA2切割30min
4:SpRY蛋白加gRNA3切割30min
产品保存和使用注意事项:
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