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货号: X2407
产品名称: MOPS-SDS蛋白电泳缓冲液干粉(5×)
英文名称: MOPS-SDS Running Buffer Powder (5×) for Bis-Tris Gels
规格: 5×,每袋可配制1L 5×母液(或根据后续步骤最终配制成5L 1×工作液)
一、产品概述
本产品为预混干粉,主要成分为Tris-base、MOPS、SDS、EDTA。用户只需加水溶解,即可获得高品质的5×浓缩母液。该缓冲液专为Bis-Tris凝胶系统优化,能够有效维持电泳过程中的pH稳定,获得清晰的蛋白条带,特别适用于分离分子量范围在14–200 kDa之间的蛋白质。
二、储存与运输:
室温干燥处密封保存,避免受潮;可保存2年; 常温运输,重量轻、便于储存。
三、使用方法:
第一步:配制5×浓缩母液(以配1L 5×母液为例)
1、准备容器: 取一个洁净的烧杯或试剂瓶(容量大于1L),加入约 800ml 的去离子水或超纯水。
2、溶解干粉: 将一整袋干粉缓缓倒入水中,置于磁力搅拌器上搅拌,确保粉末完全溶解。请勿局部结块。
3、pH确认:检查溶液pH值是否在7.3-7.7范围内。通常在正确配水下无需调节。若偏差较大,可用4M NaOH或HCl微调。
4、定容:补加去离子水定容至1000ml,再次混匀。
5、储存: 即得5× MOPS电泳缓冲液母液。4℃保存备用。低温下如有SDS沉淀析出,使用前需加热溶解。
第二步:稀释成1×工作液(用于电泳)
1、检查母液: 取出配好的5×母液,确认无沉淀。如有沉淀,37℃水浴加热溶解并冷却至室温。
2、稀释: 量取 50ml 的5×母液,加入到盛有 200ml 去离子水的容器中。
3、混匀: 充分搅拌或颠倒混匀,即得250ml 1× MOPS电泳缓冲液工作液。
4、电泳:
内槽: 必须使用新鲜配制的1×工作液。
外槽: 可使用回收的1×电泳缓冲液。
加样: 安装凝胶,倒入缓冲液,冲洗加样孔后上样。
电泳: 浓缩胶80V,分离胶120V,直至溴酚蓝染料到达凝胶底部。
四、注意事项:
1、体系兼容性: 本品仅适用于Bis-Tris体系的预制胶或自制胶。
2、溶解彻底: 干粉溶解时,务必确保所有颗粒完全溶解,尤其是SDS成分。若溶解不完全,会影响电泳效果。
3、水质要求: 请使用去离子水或超纯水(电阻率≥18.2MΩ·cm),避免自来水中的离子干扰缓冲体系。
4、沉淀处理: 配制好的5X母液在4℃或冬季室温较低时可能出现白色沉淀(SDS析出)。此为正常现象,使用前需加热溶解,摇匀后再稀释。
5、回收使用: 1X工作液可回收作为外槽缓冲液使用1-2次。若发现电泳速度明显变慢或条带异常,请停止使用回收液。
6、安全防护: 操作时请穿戴实验服和手套,避免粉末吸入或与皮肤直接接触。若不慎入眼,请立即用大量清水冲洗。
7、用途限制: 本产品仅供科研使用,不可用于临床诊断。
Q:溶解后溶液有点浑浊/有沉淀不溶解?
A:可能原因:1. 水温过低,SDS未完全溶解。可加热至37℃搅拌促进溶解。2. 水质过硬或pH异常,建议更换超纯水。3. 干粉受潮结块导致溶解困难,搅拌时间需延长。
Q:为什么我配的缓冲液跑胶效果不好(条带扭曲)?
A:可能原因:1. 溶解时未搅拌均匀,导致局部浓度不均。2. 稀释成1X工作液时比例错误。3. 凝胶类型与缓冲液不匹配。
Q:“倒微笑” 或 “哭脸”现象。在MOPS缓冲液体系中,出现中间慢、两边快的弧形条带?
A:可能原因:
1.内槽漏液:液面下降导致中间孔道电流受阻,两边正常。检查密封垫,加满缓冲液,保持内外液面持平。
2.电压过低:样品迁移慢,扩散和边缘效应放大,两边稍快。 建议电压设为140–180 V(Bis-Tris胶+MOPS)。
3.凝胶聚合不均:中间聚合过度、孔径小,阻力大、迁移慢。混匀APS/TEMED,避免高温聚合。
4.样品盐浓度过高:干扰迁移,可能变快或变慢。保持各样品盐浓度一致,避免高盐洗脱液直接上样。
5.凝胶老化或破损:中间微小破损或贴合不紧,迁移路径不连续。使用新鲜凝胶,灌胶时避免气泡。