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4 x 蛋白上样缓冲液 (Laemmli Sample Buffer)

货号：X2406

产品名称： 4×蛋白电泳上样缓冲液

英文名称： 4X Protein Loading Buffer / SDS-PAGE Sample Buffer

规格： 1mL / 5mL / 10mL等

一、产品概述

本产品为4倍浓度的蛋白电泳上样缓冲液，专为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 设计。其主要功能是将蛋白质样品变性、还原并染色，同时提供合适的密度以确保样品在加样孔中沉降，并含示踪染料以监控电泳进程。

二、储存与运输：

室温干燥处密封保存；可保存2年; 常温运输、便于储存。

三、产品成分 ：

主要组分如下：

缓冲体系： Tris-HCl (pH 6.8)，提供稳定的pH环境。

变性剂：十二烷基硫酸钠 (SDS)，使蛋白质变性并带上均匀的负电荷。

染色剂：溴酚蓝，作为前沿指示染料。

密度剂：甘油，增加样品密度，便于加样。

还原剂：若进行还原性SDS-PAGE电泳需自备1M DTT；而检测二硫键连接的全蛋白，需进行非还原电泳，则不需要添加还原剂。

四、使用方法：

A. 样品制备

1.稀释:

取适量蛋白样品溶液（例如细胞裂解液、纯化蛋白等）于离心管中。

2.混合:

按蛋白样品体积 : 4x 上样缓冲液体积 = 3 : 1 的比例加入本产品。例如，30 μL 蛋白样品加入10 μL 4x上样缓冲液、4μL 1M DTT，混匀（此时为1x工作浓度）。

3.变性:

将混合样品置于金属浴或沸水浴中加热 5-10 分钟，使蛋白质充分变性和还原。

4.短暂离心:

加热后，短暂离心（~12，000 g，30秒）以收集管壁冷凝液。

B. 上样与电泳

1.       将处理好的样品直接加入SDS-PAGE凝胶的加样孔中。

2.       连接电泳仪，在恒压模式下进行电泳（例如，浓缩胶80V，分离胶120V）。

3.       当指示染料（溴酚蓝）迁移至凝胶底部附近时，即可停止电泳。

五、注意事项 ：

1.       安全: SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）对眼睛和皮肤有刺激性。操作时请佩戴手套和护目镜，并在通风良好的地方进行。β-巯基乙醇有强烈刺激性气味。

2.       加热: 加热变性步骤至关重要，不可省略，以确保蛋白质完全解聚和线性化。

3.       沉淀: 若缓冲液出现沉淀（特别是SDS在低温下析出），请使用前在37°C水浴中加热并涡旋至完全澄清。

4.       还原剂稳定性: DTT溶液在空气中易氧化，开封后应尽快使用。如果样品无需还原状态，可不添加。

5.       兼容性: 请确认您的下游应用（如Western Blot、质谱分析）是否与缓冲液中的组分兼容。例如，进行质谱分析时通常选择不含碘乙酰胺（IAM）或溴酚蓝的配方。

6.       体积计算: 确保终体积（样品+缓冲液）不超过加样孔容量。

六、应用范围 ：

1.        常规SDS-PAGE蛋白电泳分析。

2.        Western Blotting 的样品前处理。

3.        蛋白质分子量估算。

4.        蛋白质纯度检测。