lncRNA qPCR检测服务

lncRNA是具有调控功能的长链非编码RNA，可用作新的潜在生物标志物。检测RNA最常用和简便的方法就是qPCR。然而，由于lncRNA的表达丰度通常较低，常规qPCR检测方法直接用于lncRNA检测面临一些困难。

针对lncRNA的特点，我们设计了专门的lncRNA qPCR检测方案。采用专门设计的反转录引物组和转录程序，保证内参和lncRNA得到可靠转录的同时，大幅降低无关基因的转录。我们优化了qPCR程序，加入了预扩增步骤，提高了检测的线性范围，并且提高了信号强度。经过优化，部分lncRNA的检测结果从Ct值40以上，提高到了27-29，可以可靠的分析lncRNA的表达量变化。

反转录方案设计

常规的反转录采用六核苷酸随机引物、oligo dT引物或者二者的组合进行反转录。经过我们的实践，这两种引物检测lncRNA效果均不好。分析原因有两点。第一，lncRNA并不一定带有polyA尾，导致不能转录。第二，六核苷酸随机引物对于高丰度、较长的基因转录量偏大。对于低丰度、长度短的基因转录量偏低。二者结合造成了对lncRNA极低的转录效率。

针对以上情况，我们设计了针对lncRNA和内参基因设计数条特异引物的转录方案。这种转录方案中的转录引物和酶都过量，转录产物量由体系中的lncRNA含量决定，而不会受到大量无关基因的干扰，适合检测已知lncRNA。

qPCR反应的优化

我们还改进了qPCR的检测程序，在常规检测程序前加入touch down预扩增步骤，在提高特异性的同时，放大进入qPCR检测的模板量。

经过系列优化，lncRNA检测成功率和准确性得到保证。

客户送检提供内容：

待测样品：新鲜组织样品>100mg；RNA样品>5ug。

资料：待测基因序列或者登录号。

lncRNA qPCR检测服务提交的报告：

完整的实验报告，包括使用的试剂、引物序列、仪器信息等。

实验结果数据原始文件及分析软件；扩增曲线、溶解曲线、结果分析。

我们也提供相关的lncRNA稳转细胞株服务、lncRNA表达载体构建等，欢迎客户垂询！