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pLV-CAG-Puro CAG启动子慢病毒基因过表达载体(VL3008)

载体特性：

类型：慢病毒基因过表达载体

基因启动子：CAG promoter

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin

pLV-CAG-Puro载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。CAG启动子人工构建的组合启动子，由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。实验表明，CAG启动子在长期表达中不易沉默，在部分细胞中表达效率高于CMV启动。该启动子在常见的CMV启动子载体外，提供了另一种的表达方案。

PGK启动子驱动表达Puromycin抗性基因。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基因，可以方便地使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。

pLV-CAG-Puro载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb，多数哺乳动物基因都可以在pLV-CAG-Puro中成功表达。

用法说明

pLV-CAG-Puro载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-CAG-Puro载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

正向测序引物：CAG-F：GGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACC

反向测序引物：PGK-R：GGAGGAGTAGAAGGTGGCG

主要载体元件位置

•5' LTR: 1–634

•Psi (packaging signal): 681–806

•RRE: 1303–1536

•cPPT/CTS: 2028–2144

•CAG promoter: 2185–3851

•MCS (multiple cloning site): 3887–3948

•PGK promoter: 3964–4463

•Puromycin resistance gene:4484–5085

•WPRE:5097–5685

•3' LTR: 5892–6535

•pUC origin: 7055–7643(complementary)

•Ampr(R): 7814–8674(complementary)

原核培养特性

pLV-CAG-Puro载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。

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VL3008