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载体特性:
类型:慢病毒基因表达载体
荧光标签:Ranilla Luciferase
真核细胞筛选抗性:puromycin
原核抗性:Ampicillin
pLV-RLuci-puro载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体,用于稳定表达Ranilla Luciferase(RLuci)基因。该载体由CMV启动子单独启动RLuci基因表达,客户可以使用该载体构建稳定表达RLuci基因的细胞株,也可以将CMV启动子替换为其他的启动子,达到特殊的实验目的。
PGK启动子驱动表达puromycin抗性基因。可以使用puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。
酶切位点:
CMV启动子:gctagcgctaccggactcagatctcgaatt
RLuci:ATGACTTCGAAAGTTTAT
鉴定引物:
F:gtttattacagggacagcagag
R:agttatcatccgtttcctttgt
产物大小:795bp。鉴定位置:CMV
用法说明
pLV-RLuci-puro载体与包装载体共转染HEK293T 细胞后(包装体系货号 KLV3501 和 KLV3502),产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒,可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。
原核培养特性
pLV-RLuci-puro载体为高拷贝质粒,带有氨苄抗性基因,可以在含有100ug/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5a,JM109,TOP10等常见大肠杆菌菌种。
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