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载体特性
类型:慢病毒RNA干扰载体
shRNA启动子:Human U6 promoter
荧光标签:EGFP
真核细胞筛选抗性:无
原核抗性:Ampicillin
pLVshRNA-eGFP载体是基于HIV1的慢病毒RNA干扰载体,用于表达人工设计合成的shRNA,干扰目标基因的表达。RNA干扰序列插入到载体中HpaI和XhoI之间,由III类RNA聚合酶启动子U6启动子转录产生shRNA,经剪切后产生成熟siRNA,产生干扰效果。pLVshRNA-eGFP载体表达EGFP荧光蛋白,可以方便地观测病毒感染效率以及用流式荧光分选的方法筛选出阳性细胞。pLVshRNA-eGFP载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑,具有包装效果稳定,病毒滴度高等优点。
使用说明
pLVshRNA-eGFP载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定干扰目标基因表达。pLVshRNA-eGFP载体与包装载体共转染HEK293T细胞后(包装体系货号KLV3501和KLV3502),产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒,可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。
原核培养特性
pLVshRNA-eGFP载体为高拷贝质粒,带有氨苄抗性基因,可以在含有100ug/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5a,JM109,TOP10等常见大肠杆菌菌种。
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注意:
本载体中的部分序列来自已公布数据库,本公司没有对该载体完全测序。