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购买Cas9基因敲除试剂盒赠送配套筛选载体

标签: 发布时间:2015-04-04

 即日起凡购买CRISPR/Cas9试剂盒(货号CR001)或者CRISPR/Cas9 Nick试剂盒(货号CR002),免费赠送配套细胞筛选质粒pEGFP/puro一支。

 

    试剂盒介绍

    一、CRISPR/Cas9试剂盒 货号:CR0001

    CRISPR/Cas9试剂盒的功能包括:构建针对靶基因的基因敲除载体,对基因敲除靶点进行验证,基因敲除载体pCas9/gRNA1与筛选载体pEGFP/puro共转染目的细胞,挑选转染成功的细胞。

    包含以下几个组分:

    pCas9/gRNA1载体:表达野生型Cas9蛋白和gRNA,实现对靶点DNA的双链切割。根据目标基因的靶点设计好gRNA后克隆到pCas9/gRNA1载体,转染目的细胞实现对目标基因的定点切割。

    pEGFP/puro载体:表达EGFP荧光蛋白和puromycin抗性基因。与pCas9/gRNA1载体共转染目的细胞后可以用嘌呤霉素或流式细胞仪对转染成功的细胞进行初步筛选,提高基因敲除细胞的检出成功率。

    pTYNE载体:含有突变的EGFP。用于验证靶点切割效率。

    pCas9-P、pCas9-N:根据pTYNE空载体序列设计的阳性对照和阴性对照。

     

    二、CRISPR/Cas9Nick试剂盒 货号CR0002

    CRISPR/Cas9Nick试剂盒的功能和组成与CRISPR/Cas9试剂盒类似,将CRISPR/Cas9试剂盒中的pCas9/gRNA1载体替换为pCas9/gRNA3载体。pCas9/gRNA3载体表达突变的Cas9蛋白,需要一对gRNA靶点才能实现对DNA的双链切割。与CRISPR/Cas9试剂盒相比,该试剂盒提供更高的特异性,但对靶点的设计要求更高,敲除效率一般低于CRISPR/Cas9试剂盒。

     

    实验方法:

    使用Cas9 kit配套筛选载体对阳性细胞进行筛选


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