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产品简介:
Polyfect-C转染试剂是新一代纳米转染试剂,适合用于多数贴壁动物细胞系,悬浮动物细胞系以及多数原代细胞。具有细胞毒性低,操作简便,血清和抗生素对转染无影响,质粒和转染试剂用量少等显著优点。该转染试剂操作简便,孵育时间短,转染效果可靠。
规格:
货号 | 规格 |
P2011-0.5 | 0.5ml |
P2011-1 | 1ml |
保存:
本品在4℃可保存3个月,如需长期保存可在-20℃冻存。
冻融后缓慢吹吸混匀,切勿剧烈震荡。
转染前注意事项:
转染密度以80%-95%比较合适。
如果长时间未使用转染试剂,使用前需吹吸混匀转染试剂。
转染复合物形成后血清和抗生素对转染无影响,但形成转染复合物过程中不能有血清和抗生素。
不同细胞培养装置的转染试剂和质粒用量见下表。表中的用量根据HEK293V细胞优化。如果用Polyfect-C转染其他细胞,也可以参照表中的量进行。
细胞培养装置 | DNA用量(ug) | 稀释DNA的稀释液体积(ul) | Polyfect-C转染试剂体积(ul) | 稀释Polyfect-C的稀释液体积(ul) | 细胞培养液总体积(ml) |
96孔板 | 0.1 | 5 | 0.2 | 5 | 0.1 |
24孔板 | 0.5 | 12.5 | 1 | 12.5 | 0.5 |
12孔板 | 1 | 25 | 2 | 25 | 1 |
6孔板 | 2.5 | 62.5 | 5 | 62.5 | 2 |
6cm皿 | 5 | 125 | 10 | 125 | 5 |
10cm皿 | 15 | 375 | 30 | 375 | 10 |
操作步骤:
下面以10cm平皿为例说明转染步骤。
转染前24小时,将293V细胞以 4-5×10 6 /10cm平皿密度接种,加入10ml培养基37℃,5% CO2培养。细胞转染前密度应达到90%。
吹吸混匀Polyfect-C转染试剂。
准备2个离心管,按以下顺序分别制备质粒和转染试剂稀释液。
离心管1(质粒DNA) |
| 离心管2(转染试剂) |
质粒1ug |
| Polyfect-C转染试剂30 ul |
DMEM无血清培养基X μl |
| DMEM无血清培养基345ul |
总体积375ul |
| 总体积375ul |
充分混匀。
将转染试剂稀释液(离心管2)加入质粒DNA溶液(离心管1)中,立刻充分混匀。注意加入顺序非常重要。
室温孵育转染混合液5分钟。混合液可以在2小时内保持稳定。
将转染混合液逐滴加入步骤1准备的细胞培养皿,前后晃动培养皿,充分混匀。
37℃培养。
如果需要换液,可在转染后4-6小时进行,不会影响转染效果。
继续培养24-48小时进行细胞检测或其他操作。