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pLV-NFAT-ER-Luci信号通路慢病毒载体(VL4101)


 

 

产品说明：

NFAT（Nuclear  Factor of Activated T cells）转录因子家族在免疫反应中对多种细胞因子的表达有重要作用，也参与了肿瘤免疫、心肌功能调控、凋亡等多种功能。包括钙调蛋白和蛋白激酶C在内的多种信号通路都可以通过NFAT发挥作用。 


pLV-NFAT-RE-Luci 载体通过报告基因luciferase（萤火虫荧光素酶）检测NFAT信号通路活性。该载体的NFAT-RE启动子由多个NFAT  response原件和Minimal启动子组成。NFAT激活启动下游luciferase基因转录。Luciferase可以催化底物发光，从而灵敏地反应NFAT信号通路的活性。 


pLV-NFAT-RE-Luci载体与在包装载体pH1和pH2（货号KLV3500）的配合可以产生慢病毒。该载体主要用于NFAT活性检测稳转细胞株构建。

 

 

产品资料：

品名：pLV-NFAT-RE-Luci 载体

货号：VL4101

类型：细胞信号通路研究慢病毒载体
基因启动子：NFAT Response promoter
报告基因：Luciferase
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin


载体图谱：

 

使用步骤简介：

包装慢病毒→慢病毒感染目的细胞株→筛选出NFAT-RE报告基因稳转细胞株→通过稳转细胞株研究NFAT信号通路。



使用说明：

1、 本产品提供质粒小提产物，约3-5ug质粒。不能直接用于转染实验。收到产品后请转化大肠杆菌感受态，制备转染级质粒。并及时冻存质粒和菌种。
2、 转化时采用含Ampicillin 50-60ug/ml的LB平板及培养基。
3、 真核筛选抗性为puromycin，使用浓度一般为0.5-10ug/ml。不同细胞株的最佳筛选浓度差别很大，需要在实验前通过预实验确定。实验方法请见：http://www.inovogen.com/news/2012/0423/115.html。


 

注意事项：

1、 该载体不适用于瞬时转染的方法研究信号通路活性。
 2、 由于慢病毒载体本身特点，不能在载体中添加polyA终止信号，所以如果病毒转染时恰好整合到细胞基因组内启动子的下游，就会出现本底表达比较高的情况。我们推荐转染后挑选单克隆细胞株，从中选出报告基因本底表达低，对刺激反应灵敏的细胞。
 
 

实验举例：

NFAT activity assay

NFAT-RE-Luci（293）稳转细胞株功能检测实验结果。细胞用PMA 5ng/ml+Ionomycin 1uM刺激6小时，收集细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶反应底物，用化学发光成像仪成像。


 

说明书下载：

pLV-NFAT-RE-Luci（VL4101）

 

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