293-Cre-RE-Luci信号通路细胞株（CS028）-信号通路研究细胞株-稳定细胞系构建_大肠杆菌基因编辑_慢病毒载体

CRISPR/Cas9

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产品说明：	CRE 是转录因子CREB（CRE binding protein）的DNA 结合序列。CREB 磷酸化后结合到CRE，从而启动下游基因转录，产生cAMP 信号通路激活的多种反应。cAMP 信号通路参与多种生物功能调控，如细胞增殖、心率及记忆等。 Cre-RE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的Cre信号通路报告单克隆细胞株。该细胞株采用转座子系统，在293V细胞中稳定转入Cre激活的Fireflyluciferase基因，可灵敏报告Cre信号通路的活性。该细胞株是经过单克隆筛选的高灵敏克隆株，本底表达低，对刺激反应灵敏。细胞性状稳定。
产品资料：	品名：Cre-RE-Luc细胞株（293）货号：CS028 原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆）构建方法：转座子构建单克隆筛选抗性：hygromycin 克隆属性：单克隆细胞株培养基：DMEM（gibco 货号：12100-061）高糖培养基+10%FBS，hygromycin100ug/ml *注意：采用质量可靠的血清非常重要* ！
细胞形态：
产品包装及发货：	1 x 10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意事项：

培养方法：

试剂配制：

培养基：DMEM高糖培养基+10%FBS，Penicillin 100ug/ml，Streptomycin 100ug/ml，hygromycin100ug/ml
漂洗液：PBS
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于PBS

冻存液：DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

注意事项：生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%（大部分细胞相互接触，细胞间有少量间隙）时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

细胞冻存：

NFAT信号通路激活实验：

试剂：

Forskolin（碧云天，S1612），用DMSO配制为1mM
萤火虫荧光素酶检测试剂盒（碧云天，RG005）

检测培养基：DMEM含0.5%FBS，0.5%DMSO

实验步骤：

消化收集生长良好的细胞，均匀铺至96孔板，培养24小时。
配制含0.5%FBS的DMEM培养基,加入Forskolin至终浓度为5uM,作为刺激液。用检测培养基2倍倍比稀释刺激液16组。对照组为检测培养基，共计18组。用稀释好的刺激培养基和对照培养基替换原培养基，继续培养6小时。每个刺激浓度3个重复孔。
刺激完成后去除培养基，每孔加入15ul裂解液，然后按照萤火虫荧光素酶检测试剂盒说明书进行检测。

实验结果：

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