微信扫一扫

下载说明书

优惠信息
细胞系服务
分子生物服务
CRISPR/Cas9
病毒表达
circRNA
产品

在线询价


*电子邮件:

*电话:

*单位:

*感兴趣的服务或产品:

详细说明:

看不清?点击更换看不清?

当前位置:主页 > 细胞系服务 > 细胞株现货产品 > 信号通路研究细胞株 >

293-ERE-Luci细胞株(CS007)

产品说明:

ERE-Luci细胞是基于293V细胞株构建的单克隆细胞株。该细胞株通过慢病毒系统构建。细胞中稳定转入由雌激素受体反应元件控制表达的Luciferase基因和雌激素受体ESR2。该细胞对雌激素刺激反应灵敏,可以通过Luciferase活性灵活反应雌激素受体激活。

产品资料:

品名:ERE-Luci细胞株(293)
货号:CS007
原始细胞株:HEK293V(HEK293T亚克隆)
所用载体:pLV-ERE-Luci(VL4107),pLV-ESR2-HygroVL4107A
构建方法:慢病毒转染构建
抗性:puromycin hygromycin
克隆属性:多克隆细胞株

产品包装:

1×10^6 细胞/支,1支。干冰运输。

产品验收注意事项:

  1. 细胞收到时应该是冻存状态,并且有干冰保护。如果收到货时细胞已融化,请立即联系我们。
  2. 我们建议您收到产品后立刻储存于液氮,或者对细胞进行复苏,扩增培养并大量冻存。不可保存于-20℃、-80℃冰箱。
  3. 由于运输影响,细胞复苏后1到3代可能出现形态异常,生长缓慢等情况。请传代培养2-3代,待细胞恢复正常再进行实验。

细胞形态:

细胞培养基:

DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml
注意:采用质量可靠的血清非常重要!

 

 

方法:


试剂配制:

培养基:DMEM高糖培养基+10%FBS,Penicillin 100ug/ml,Streptomycin 100ug/ml
漂洗液:PBS
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA,溶解于PBS
冻存液:DMEM高糖培养基+40%FBS+10%DMSO

初始培养(细胞复苏及培养):

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养,冻存足量细胞以备以后实验使用。

  1. 准备37℃恒温水浴,细胞培养基,60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。
  2. 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化,期间不断晃动冻存管加速溶解。
  3. 3000g 室温离心5min。
  4. 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。
  5. 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿,补足培养基至5ml。
  6. 37℃,5% CO2培养24h,观察细胞贴壁情况。
  7. 48h后根据细胞密度换液或传代。
  8. 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个(约1个10cm培养皿的量),准备冻存液冻存细胞。剩余细胞用于实验。

注意事项:生长密度对于293细胞很重要。细胞密度达到90%(大部分细胞相互接触,细胞间有少量间隙)时需要及时传代。生长过密会造成细胞状态不可逆变差。

细胞冻存:

  1. 消化生长良好的细胞,用细胞培养基重悬,细胞密度为1×10^6 /ml左右。
  2. 加入等体积的2×冻存液(80%FBS+20%DMSO)。轻轻吹吸混匀。
  3. 分装到冻存管中。放入程序降温盒过夜。
  4. 将细胞转移到液氮罐中。

细胞功能实验:

药物染料木素(Genistein)刺激细胞,与细胞内过表达的雌激素受体结合,激活雌激素应答原件,并启动luciferase表达,通过检测luciferase活性可以灵敏地反应雌激素受体的作用效果。
试剂:染料木素(货号:G106672,阿拉丁);萤火虫荧光素酶检测试剂盒(货号:RC005,碧云天)

  1. 实验前一天将ER, ERE基因过表达细胞株293-ER/ERE接种到24孔板;
  2. 接种24h后实验组加入药物染料木素,至终浓度为1μM、10μM。每种浓度三孔重复,对照组不加药;
  3. 染料木素刺激24h后按照荧光素酶检测试剂盒说明收集细胞,并加入反应底物进行活性检测。

用化学发光成像仪检测结果见下:

 

说明书下载:

CS007说明书


  • 上一篇:NFKB-RE-EGFP细胞株(293)
  • 下一篇:没有了

  • 版权所有 重庆英茂盛业生物科技有限公司 网站备案:渝ICP备19010777号
    地址:重庆市江北区港桥支路4号聚丰国际C座7楼 电话:023-67630383
    产品订购:order@inovogen.com 产品咨询:market@inovogen.com

    Cas9/基因敲除稳定细胞系构建/稳转细胞株稳转细胞系现货产品