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pCas9/gRNA1基因敲除载体(CR1001)

 

pCas9/gRNA1载体用于动物细胞基因敲除。该载体用CRISPR系统进行基因敲除，通过在同一个质粒中表达Cas9蛋白和gRNA，实现单独转染一个质粒即可产生基因敲除效果。敲除效率可以与TALEN系统相当，而基因敲除质粒的构建则相对简便很多。使用pCas9/gRNA1，有基础分子生物学实验经验的研究人员可在一天内完成质粒构建，无需添加特殊设备和试剂。

我们新推出pCAS9/gRNA1的配套筛选质粒pEGFP/puro。该质粒与pCAS9/gRNA1载体共转染细胞，提供荧光信号及筛选抗性，可以对转染阳性的细胞进行初步筛选，提高基因敲除成功率。

 

载体特性：

 

类型：哺乳动物细胞基因敲除载体
表达基因：gRNA；Cas9蛋白
原核抗性：Ampicillin

 

 




 

 

用法简介:

Cas9载体同时表达Cas9蛋白和gRNA。gRNA靶点序列通过载体中的EcoRV酶切位点连接到pCas9/gRNA1载体。转染细胞后gRNA诱导Cas9蛋白对靶基因进行特异切割，通过邻端结合或同源重组修复DNA断裂点，实现对靶基因进行基因编辑。

pCas9/gRNA1载体中含有gRNA序列3’端49bp序列及polyT终止信号。gRNA包括基因特异靶序列的5’端序列通过载体中EcoRV酶切位点连接到载体上。连接后的完整序列见下：






GATATC：EcoRV克隆位点
AGCTA：人工插入gRNA 5’端序列
NNNNN：19nt靶点识别序列
AACTT：gRNA3’端序列
TTTTT：PolyT终止信号

实验流程：

将靶点构建到pCas9/gRNA1载体→与pEGFP/puro载体共转染细胞→筛选阳性细胞→检测靶基因敲除情况

Cas9蛋白对靶点切割示意图



应用实例：

• pCas9/gRNA1基因敲除载体对照实验

• pCas9/gRNA3基因敲除载体对照实验

• 用pCas9/gRNA1载体敲除293T细胞中的TP53基因 

• 使用Cas9 kit配套筛选载体对阳性细胞进行筛选

 

资料下载：

pCas9/gRNA1载体图谱 CRISPR/Cas9试剂盒使用说明