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CRISPR Cas9 AAVS1定点基因敲入产品简介

标签: 发布时间:2017-09-26

CRISPR Cas9

AAVS1定点基因敲入产品简介

1、技术简介

AAVS1 位点(又称为 PPP1R2C 位点)位于人类基因组第19号染色体,是一个经过验证、能确保转入 DNA 片段预期功能的“安全港”位点。该位点是一个开放的染色体结构,能保证转入基因能被正常转录。另外很重要的一点是在该位点插入外源目的片段对细胞无已知的副作用。
英茂盛业AAVS1 CRISPR-Cas9 体系能特异剪切人类第19号染色体上的 AAVS1 位点,生成DNA双链断裂(DSB),触发DNA的自然修复机制,诱导位点与 AAVS1供体 DNA 克隆之间发生同源重组(HR),将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。

技术优势:

  1. Cas9-HF1:高保真的Cas9蛋白突变体,显著减少非特异性切割。
  2. Lig4 RNAi:RNA干扰邻端连接修复的关键酶,增加同源重组修复比例。
  3. 已验证的AAVS1靶点和重组臂:促进高效基因插入。


图1、CRISPR/Cas9 AAVS1位点敲入原理

2、产品组成

2.1、pCas9gRNA6-AAVS1 Vector

 

Cas9-HF1:高特异性spCas9突变体。
AAVS1 sgRNA:特异识别AAVS1靶点的sgRNA。
Lig4:DNA连接酶4 RNA干扰序列。抑制细胞邻端修复功能。

 

2.1、pHR-AAVS1 Vector

AAVS1 HA:AAVS1同源重组臂
GOI:需要插入的目的基因
Selection Marker:有3种筛选标签可选:puromycin抗性基因、tagRFP+ puromycin抗性基因、sfGFP+ puromycin抗性基因

 

3、工作流程


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