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SacB基因是来自枯草芽孢杆菌的糖代谢相关基因,其作用为将蔗糖转变为果聚糖。由于大肠感觉缺乏处理果聚糖的基因,在大肠杆菌中表达SacB基因,会导致SacB基因的产物果聚糖在大肠杆菌中聚集,导致细菌死亡。因此,无需其他条件,仅需在培养基中添加10%蔗糖,就能实现对大肠杆菌的筛选。
SacB基因的应用举例如下
Crispr Cas9 系统在微生物的基因敲除,定点插入等普遍应用,在大肠杆菌中也不例外,如下我们可以看到,这是在大肠杆菌中进行敲除时采用的Cas9质粒,在该质粒中存在sacB基因,这个基因的存在是为了干什么呢?
其实,这个Cas9,SgRNA, 以及donor DNA 在导入大肠杆菌完成重组后,如何做到把含有Cas9的质粒进行消除呢,这就是一个问题。
这个时候就可以在质粒上添加sacB基因,通过在培养基中添加蔗糖,由于蔗糖存在时,SacB基因编码的蛋白可以将蔗糖转化成果糖,而果糖的积累对大肠杆菌产生毒性,在这种压力的作用下,能够丢掉质粒的菌株便可存活,而无法丢掉质粒的,就死亡了。