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pLV-CAG-mcherry-N CAG启动子慢病毒基因过表达载体(VL3223)

载体特性：

类型：慢病毒基因过表达载体

基因启动子：CAG promoter

荧光标签：mcherry

真核细胞筛选抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin

pLV-CAG-mcherry-N载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。CAG启动子人工构建的组合启动子，由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。实验表明，CAG启动子在长期表达中不易沉默，在部分细胞中表达效率高于CMV启动。该启动子在常见的CMV启动子载体外，提供了另一种的表达方案。

PGK启动子驱动表达Puromycin抗性基因。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基因，可以方便地使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。

本载体可以用于表达目的基因-mcherry融合蛋白或者单独表达mcherry基因。载体对外源基因片段的容量约2kb，多数哺乳动物基因都可以在pLV-CAG-mcherry-N中成功表达。

用法说明

pLV-CAG-mcherry-N载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

正向测序引物：CAG-F：GGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACC

反向测序引物：mcherry-R：ccctccatgtgcaccttga

主要载体元件位置

•5' LTR: 1–634

•Psi (packaging signal): 681–806

•RRE: 1303–1536

•cPPT/CTS: 2028–2144

•CAG promoter: 2185–3851

•MCS (multiple cloning site): 3902–3948

•mcherry:3949–4659

•PGK promoter: 4680–5179

•Puromycin resistance gene:5200–5799

•WPRE:5813–6401

•3' LTR:6608–7241

•pUC origin: 7771–8359(complementary)

•Ampr(R): 8530–9390(complementary)

原核培养特性

pLV-CAG-mcherry-N载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。

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VL3223