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HEK293V-tet可诱导EGFP细胞株(CG018)

品名：HEK293V-tet可诱导EGFP细胞株

货号：CG018

包装：1×10^6~1×10^7     1 支

细胞株类型：诱导表达表达EGFP荧光蛋白多克隆细胞株

细胞来源：HEK293V 细胞（人胚肾细胞）

表达基因：EGFP

培养基：DMEM（gibco 货号：12100-061）高糖培养基+10%FBS  puromycin 2ug/ml  Blasticidin 4ug/ml

消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA

冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO

培养条件：37℃，5% CO₂

产品简介：

Tet-On系统是一种用于哺乳动物细胞的可诱导基因表达系统。HEK293V-tet可诱导EGFP细胞株表达Tet-On转激活蛋白，并且包含一个位于TRE启动子控制下的EGFP基因。该细胞可在多西环素（Dox）存在时高水平表达EGFP荧光蛋白，培养时需要puromycin和Blasticidin抗生素维持，可作为Tet-On诱导实验中的对照细胞株使用。

细胞株构建方法：

慢病毒载体pLV-TetON-Bsd（货号EL6001）与慢病毒载体pLV-TRE-EGFP-puro（货号EL6003）包装慢病毒后感染HEK293V细胞，用puromycin和Blasticidin共同筛选得到的可诱导表达EGFP多克隆细胞株。

收到细胞的处理：

根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存 细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。

干冰运输细胞：

1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化过程。待细胞冻存液完全融化后，用 70%乙醇消毒细胞 冻存管外壁。

2、 室温 200g 离心 5 分钟收集细胞。吸去上清。

3、 用 1ml 培养基重悬细胞。

4、 将细胞接种到 6mm 培养皿或 25cm 培养瓶中，补加 5ml 培养基，37℃ 5% CO₂培养。

常温运输细胞：

1、 3000g 10min 室温离心收集细胞。

2、 用细胞培养基轻柔吹吸重悬细胞。

3、 接种到 25cm 培养瓶或 60mm 培养皿，补足培养基到 5ml。

4、 放到细胞培养箱，37℃ 5% CO₂ 培养过夜。

5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续培养。

6、 细胞生长后及时消化传代，尽早扩增并批量冻存。

细胞传代：

1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到 37℃。

2、 吸去细胞培养液。

3、 用 PBS 漂洗一次。

4、 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱 中，37 ℃消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。

5、 加入 5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。

6、 按 1:3 到 1:5 接种细胞。

细胞冻存：

1、 将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶和冻存液温浴到 37℃。

2、 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。

3、 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化， 重悬细胞。

4、 室温 200g 离心10分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞， 并调节浓度至大约 1×10^6 个细胞/ml。分装到细胞冻存管。

5、 将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。

6、 将冻存的细胞转入液氮中。

DOX刺激：

1、将HEK293V-tet可诱导EGFP细胞株接种到24孔板，接种密度60%。

2、按照终浓度0，100ng/ml加入DOX诱导EGFP蛋白表达，24h后检查荧光情况。

细胞图片：

DOX^--

DOX 100ng/ml