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<a href="http://www.inovogen.com/lentivirus/cellline/">稳转细胞株构建</a>服务|慢病毒/转座子双系统专家 - 英茂盛业(重庆)

稳转细胞株构建服务|慢病毒/转座子双系统专家(成功率>95%)

双技术系统

慢病毒+转座子 双技术平台

快速交付

最快3周 交付稳转株

支持20+细胞系

支持HEK293/CHO 等20+细胞系

功能细胞株订制

支持信号通路 等特殊功能定制

慢病毒 vs 转座子系统对比

参数 慢病毒系统 转座子系统
基因容量 ≤5kb ≤10kb
构建周期 4-6周 3-4周
本底信号 较高 可降低20倍以上
lncRNA表达 不适合 适合
精确表达控制

成功案例

1 采用转座子系统改进信号NFAT信号通路报告细胞株

我们在构建luciferase报告稳转细胞株时,先采用了慢病毒系统。但是由于慢病毒系统无法在载体中插入终止子,造成极高的本底表达,因此检测时对刺激敏感性较低。通过采用灵活的转座子系统,我们在报告基因上游和下游均插入终止信号,将本底表达的荧光数值从数万降低到数百,反应敏感性大幅提高。

比如NFKB-luciferase细胞株(CS030)就是采用转座子系统构建的NFKB信号通路报告细胞株。为了更加灵敏的反应激活信号,我们充分利用了转座子系统的灵活性,添加了多个NFKB反应元件,提高反应程度。并且在上游添加了转录终止信号,以降低本底表达。与慢病毒系统构建的NFKB信号通路的报告细胞株相比,本底信号降低了20倍,灵敏度提高了10倍以上

NFKB信号通路报告细胞株效果对比

NFKB-luciferase细胞株

  • 本底信号降低20倍

  • 检测灵敏度提升10倍

2 慢病毒系统构建细胞膜亚细胞定位单克隆细胞株

该细胞株用慢病毒将细胞膜定位的荧光蛋白导入细胞基因组,实现准确且稳定标记细胞膜。

MEM-EGFP 稳转细胞株

常见问题解答

Q: 稳转细胞株构建需要多长时间?

A: 常规项目4-5周完成,提供加急服务可缩短至3-4周(需提前沟通样本要求)。

Q: 选择哪种体系构建稳丁细胞株?

A: RNA干扰稳转细胞株及<3kb基因的过表达细胞株可以选择慢病毒系统。更大的基因会导致慢病毒系统的成功率显著降低,我们通常建议采用转座子系统。此外,对表达控制要求精确的稳转细胞实验,比如信号通路报告细胞株、lncRNA表达细胞株,也建议选择转座子系统。

Q: 需要提供哪些资料和实验材料?

A: 请提供需改造的细胞株及培养资料、目的基因序列及功能资料、含有目的基因的质粒(可选)。

Q: 稳定细胞系构建完成后提供的产品和报告?

A: 我们提供以下服务产品和报告:

1、构建的质粒及其测序结果。

2、构建完成的细胞株。

3、细胞株构建实验报告。

4、细胞株功能检测报告。

Q: 你们提供单克隆细胞株构建服务吗?与多克隆细胞株相比单克隆细胞株有何优势?

A: 我们提供单克隆细胞株构建服务,关于单克隆细胞和多克隆细胞株的介绍参见单克隆细胞株介绍

 

稳转细胞株构建服务流程图
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