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CRISPR dCas9转录激活服务

     

CRISPR dCas9 SAM技术

CRISPR SAM(synergistic activation mediator)采用切割活性缺失的dCas9蛋白融合VP64转录激活蛋白,加上能与RNA结合蛋白MS2的sgRNA2.0,特异性识别并结合目标基因的启动子。MS2蛋白上连接p65和HSF1转录激活蛋白。通过多种转录激活蛋白的协同作用,能更好的模拟细胞内转录激活(图1,CRISPR/Cas9 SAM原理)。研究表明,单一位点SAM的转录激活效果远高于多个位点dCas9-VP64的转录激活效果。


图1、CRISPR/Cas9 sam原理图(来自Konermann,et al. Nature, 2015)


CRISPR SAM组成:

  • pLV-dCas9-VP64:慢病毒载体,表达无DNA酶的dCas9与转录激活因子VP64的融合蛋白。与sgRNA结合并产生转录激活作用。

  • pLV-MPH:慢病毒载体,表达MS2/P65/HSF1融合蛋白。与sgRNA结合并协同产生转录激活作用。

  • pLV-SG20:表达改造的sgRNA,与DNA上靶点特异结合,并且结合dCas9及MS2蛋白。





    载体图谱:



    我们提供什么?

  • CRISPR SAM慢病毒载体:pLV-dCas9-VP64pLV-MPHpLV-SG20

  • 可直接转染细胞的慢病毒:dCas9-VP64表达慢病毒、MPH表达慢病毒、SG20表达慢病毒。

  • dCas9-VP64-MPH稳定表达细胞株

  • 已验证的转录激活sgRNA表达载体。

  • 特定基因转录激活细胞株。

  •  

    • pLV-SG20载体构建服务:CRIPSR SAM靶点设计及载体构建。

    • 目标基因转录激活稳定细胞株构建服务。





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