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pLV-circ-sfGFP（2A）Puro慢病毒circRNA表达载体（VL3533）

MCS

载体特性：
类型：慢病毒circRNA表达载体
基因启动子：CMV promoter
荧光标签：sfGFP
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin

pLV-circ-sfGFP（2A）Puro载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体，采用CMV启动子启动circRNA表达。载体中的SCR1和SCR1RC为经过优化的反向互补序列，可以实现高达80%的环化效率。使用时将需要环化的RNA序列插入SCR1和SCR1RC之间的酶切位点即可。

载体同时表达sfGFP基因和Puromycin抗性基因。可以使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。sfGFP基因有助于判断病毒包装效率以及感染效率，同时也有助于稳定细胞的筛选。
pLV-circ-sfGFP（2A）Puro载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb。

用法说明
pLV-circ-sfGFP（2A）Puro载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-circ-sfGFP（2A）Puro载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。

测序引物：
正向引物CMV-F：TCTAAAAGCTGCGGAATTGT
反向引物DU-R：CGGGGACTGTGGGCGATGTGCG

原核培养特性
pLV-circ-sfGFP（2A）Puro载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 ug/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。宿主菌可以采用DH5a，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。