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MDCK-EGFP稳转细胞株(CG010)

细胞特性：

细胞来源：MDCK(犬肾细胞）

细胞类型：EGFP稳定过表达多克隆细胞株

表达蛋白：EGFP

构建载体：pLV-EGFP-C（VL3215）

筛选抗生素：嘌呤霉素

培养基：DMEM （ g i b c o 货号： 1 2 1 0 0 - 0 6 1 ）高糖培养基+10%FBS

构建方法：

慢病毒载体pLV-EGFP-C包装为慢病毒，转染MDCK细胞，经嘌呤霉素筛选得到稳定表达EGFP荧光蛋白的多克隆细胞株。

细胞培养方法：

以25cm培养瓶传代为例。

1、传代前将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶温浴到37℃。

2、吸去细胞培养液。

3、用PBS漂洗1到2次。

4、加入3ml胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱中，37摄氏度消化。由于配制的胰蛋白酶活力有差别，消化时间可用30秒到1分钟。应在倒置显微镜下观察，看到细胞分开及稍微变圆即可。

5、加入5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。

6、按1:3到1:5接种细胞。

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