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MCF7-spCas9细胞株(C1207)

货号： C1207
培养基： MEM +10%胎牛血清
 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA
 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO
 培养条件：37℃，5% CO₂

细胞简介
 MCF7-spCas9细胞采用用慢病毒载体pLV-Cas9-puro构建。该细胞稳定表达野生型spCas9蛋白(C端有NLS信号)，可以转入sgRNA表达质粒或者化学合成的sgRNA对细胞基因组DNA进行定点切割，可实现重组基因编辑、基因敲除等。
该细胞为经抗生素获得的稳定单克隆细胞株。

细胞特性
 表达基因：野生型spCas9，C端NLS信号
 基因导入方法：慢病毒
 筛选抗生素：puromycin
 细胞克隆：单克隆细胞株

使用注意事项

1、MCF7-spCas9细胞采用嘌呤霉素筛选得到，表达嘌呤霉素抗性基因，后续细胞筛选实验不宜采用puromycin。

2、spCas9蛋白需要sgRNA配合才能对定点切割细胞的基因组。单独使用不能发挥基因敲除或者编辑作用。配套的sgRNA表达载体有pGR系列载体和pGR-EGFP系列 载体。MCF7-spCas9细胞推荐用pGR-Hygro（货号CR2013）和pGR-EGFP-Hygro（货号CR2016）。

3、仅采用sgRNA表达载体对目标基因切割，细胞一般通过NHEJ  (非同源重组末端连接， nonhomologous end-joining)进行修复，从而产生缺失突变。转入sgRNA表达 载体的同时转入同源重组的模板，可以通过同源重组实现基因突变或敲除。具体同源重组的设计和构建以及阳性细胞克隆筛选的方法请参照相关文献。

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