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新品!环状RNA(circRNA)慢病毒表达载体

标签:发布时间:2017-08-18 01:22:44


慢病毒circRNA表达载体用于在细胞中稳定表达目的circRNA。使用时将环状RNA序列克隆到载体中,包装为慢病毒,再用病毒感染目的细胞。通过抗生素或者荧光筛选,筛选出稳定表达目的circRNA的细胞株。


产品特点:

* 环化效率高达90%

* 在细胞中稳定表达

* 有多种标签可供选择

* 与现有慢病毒包装系统匹配



载体图谱:

pLV-circ-Puro.jpg

VL3531

VL3532

 

 

VL3533

VL3534

 

环化方式说明

SCR1和SCR1 RC为反向互补序列。RNA转录后,SCR1和SCR1 RC相互匹配,形成双链结构,促使RNA产生环化: 


根据我们的对载体产生的环状RNA进行PCR测序结果,该载体的环化RNA有以下特征:(1)载体上的MluI和XhoI位点环化后一般会保留。(2)MluI位点之前的2-9个碱基可能保留,数量可变,多数在7个以下。

 

插入片段设计

对于由外显子组成的circRNA,推荐采用以下方法设计:
设计举例(环状RNA由外显子2、3构成):


在circRNA两端保留部分相邻的内含子序列可以通过生物的内含子剪切机制,获得和预期完全一致的由外显子组成的circRNA。
内含子剪切是一个逐渐进行的过程。进行qPCR检测或者circRNA测序均可观察到含有内含子和不含内含子的两种环状RNA存在。由于不同内含子的剪切效率和速度不同,二者的比例有不同。

典型的含内含子的circRNA qPCR检测溶解曲线:

 

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